BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒 100T 

產品簡介

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒zui經典的一款

產品詳細信息

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒說明書
一、概述
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側，細胞發生凋亡zui早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側，這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA的片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。AnnexinV是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的組份：

Product code Description
556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的操作步驟 ：
貼壁細胞需用0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時，注意必須徹底清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。

四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的保存：

4℃保存，兩個月內可保持穩定；避免反復凍融。

五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒的注意事項 ：
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的zui后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進行Annexin V-FITC染色，zui短可在上機前5分鐘再加入PI染色。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產品介紹：
細胞凋亡是在胚胎發育或組織更新維護過程中的出現的一種正常生理過程。細胞凋亡程序有顯著的形態學特征，包括質膜不對性和吸附性的喪失，細胞質和細胞核的皺縮，DNA核小體分裂。質膜溶解是zui早出現的特征。在凋亡細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）會從磷脂雙層內部轉移到外部，使PS暴露在細胞外環境中。 Annexin V是一個分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴型磷脂結合蛋白質，其對PS有高親和性，可以結合到暴露到質膜外層的PS。Annexin V可以結合熒光染料，包括FITC。這種結合既保留了對PS的高親和性，同時可以作為靈敏探針，用流式細胞分析檢測鑒定正在凋亡的細胞。由于PS變化出現在細胞凋亡早期，FITC Annexin V染色可以更早地鑒定出調亡細胞，比基于細胞核變化的檢測，例如DNA斷裂要早。

FITC標記的 Annexin V 染色先于細胞凋亡或細胞壞死過程中伴隨產生的細胞膜完整性喪失的出現。因此，利用FITC標記的Annexin V染色時通常結合活體染料如碘化丙啶（PI）或7-Amino-Actinomycin（7-AAD），方便研究者鑒定出早期凋亡細胞（PI陰性，FITC Annexin V陽性）。具備完整細胞膜的活細胞可以阻止PI浸入，然而細胞膜壞死或破壞后就可以浸透PI。例如，活細胞檢測結果應該是FITC Annexin V 陰性和 PI 陰性；早期凋亡細胞是FITC Annexin V 陽性 and PI 陰性；晚期凋亡細胞或已死亡細胞是FITC Annexin V 陽性和 PI陽性。此檢測不能區分出經歷過凋亡的死細胞和經歷其它壞死途徑的死細胞，因為二者都會同時被FITC Annexin V 和 PI染色。然而，持續觀察細胞凋亡都會經歷三個階段：FITC Annexin V 和 PI 都是陰性（活細胞或沒有明顯細胞凋亡）；Annexin V陽性 和 PI 陰性（凋亡早期，具有完整細胞膜）；FITC Annexin V and PI 都是陽性（凋亡晚期或死亡）。經歷這三個階段的細胞表明是經歷細胞凋亡過程。相反，單一觀察顯示細胞FITC Annexin V和 PI都是陽性不能反映出細胞是否經歷凋亡過程。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產品組份：
Part A: 51-66121E, 10X Annexin V Binding Buffer, 50 ml
Part B: 51-65874X, FITC Annexin V , 0.5 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl
Part C: 51-66211E, Propidium Iodide Staining Solution 2.0 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl