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如何選擇優質胎牛血清?

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  血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、 多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質對促進 細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。

  胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

  顯然,胎牛血清是品質最高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。

  胎牛血清 產品描述:

  1、胎牛血清,是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其中不含細胞、纖維蛋白和凝血因子。

  2、胎牛血清在細胞培養方面通常優于其他類型的血清。由于胎牛從未接觸過外界, 與新生牛和小牛血清相比,抗體含量明顯降低,故抗體與培養細胞發生交叉反應的風險也較低,是理想的細胞生長補充劑。

  胎牛血清 功能:

  1.提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。

  2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。

  3.有些情況下 結合蛋白質能與有毒金屬和 熱原質結合,起到解毒作用。

  4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

  5.起酸堿度 緩沖液作用。

  6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

  -20℃,避光。

  在選擇血清時,應格外留意篩選內毒素:

  1.養干細胞時,干細胞對內毒素非常敏感,如果血清中內毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。2.養免疫細胞時,過高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。3.基因敲除相關的細胞實驗,培養的細胞要盡可能保持其原始狀態,任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續的實驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關重要;4.原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染,或者肝細胞、神經細胞、內皮等難養細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內毒素,是保證實驗順利的第一步。5.實驗室有些細胞,需要長期培養、長期凍存,或者經常復蘇、經常培養的,血清會經常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內毒素的血清,以避免內毒素長久對細胞的毒性影響。 總之,血清中內毒素含量過高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數據不準,或細胞狀態不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內毒素越低越好。

  內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:

  當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;

  當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;

  當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清。

  儲存條件:

  -20°C凍存。

  胎牛血清首次解凍后,應按單次習慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。

  若置于4°C的血清,應在一周內用完。

  為保證細胞培養的最佳效果,血清和培養基的配置,應遵循“現用現配”原則。配好的培養液,應于一周內用完。

  血清避免反復凍融,避免在4°C或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質。

  胎牛血清 使用說明:

  血清從-20℃取出后,融化,按推薦體積加入到基礎培養基中,混勻,制備成新鮮完全培養基。(整個操作需在無菌超凈臺中進行,注意無菌操作。)

  關于熱滅活:胎牛血清不推薦熱滅活。

  熱滅活一般是指在做免疫相關的試驗中,通過加熱滅活掉血清中的補體,以避免對免疫試驗的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補體系統,因此,胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進而影響細胞培養效果。若針對某些特殊試驗,對于胎牛血清一定要做熱滅活,國際上推薦熱滅活的方法:40℃水浴,20min。


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