Thermo Scientific Pierce Ellman 試劑 (DTNB) 與巰基基團(tuán)反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，提供了一種可靠的方法來(lái)測(cè)量溶液中的還原半胱氨酸和其他游離巰基。

Ellman 試劑（5,5'-二硫代-雙-[2-硝基苯甲酸]）用于通過(guò)與含巰基基團(tuán)化合物（如半胱氨酸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較，估計(jì)樣品中的巰基。或者，巰基基團(tuán)可使用 TNB 的消光系數(shù)（412nm 處 14,150M-1 cm-1）進(jìn)行測(cè)定。Ellman 試劑已用于巰基估算以外的應(yīng)用，例如采用柱前衍生化程序的 HPLC 烷基硫醇測(cè)定和若干酶活性位點(diǎn)硫醇的研究。

Ellman 試劑的特點(diǎn)：

?巰基測(cè)定—與游離（還原）巰基基團(tuán) (—SH) 定量反應(yīng)，以生成可檢測(cè)的 TNB 產(chǎn)物
? 比色檢測(cè)—有色產(chǎn)品支持在比色皿或微孔板中進(jìn)行分光光度測(cè)量 (λmax = 412nm; ε = 14,150/M·cm)
? 成熟的分析方法—已明確表征的化學(xué)試劑可利用消光系數(shù)計(jì)算或通過(guò)與半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，對(duì)肽或蛋白巰基基團(tuán)進(jìn)行定量測(cè)定

試劑特性
? 別名：DTNB、Ellman 試劑
? 化學(xué)名稱(chēng)：5,5'-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)
? 可與以下基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)：巰基基團(tuán) (—SH)
? 化學(xué)式：C14H8N2O8S2
? CAS 號(hào)：69-78-3
? 分子量：396.35
? 形態(tài)：黃色結(jié)晶粉末

DTCNB 與游離巰基基團(tuán)反應(yīng)生成混合二硫化物和 2-硝基-5-硫苯甲酸 (TNB)。在該反應(yīng)中，DTNB 的靶標(biāo)是一個(gè)游離巰基基團(tuán)的偶聯(lián)基 (R—S-)。因此，此反應(yīng)的速率取決于多種因素：(1) 反應(yīng) pH 值、(2) 巰基的 pKa'和 (3) 空間和靜電效應(yīng)。TNB 是此反應(yīng)生成的有色物質(zhì)，可見(jiàn)光范圍內(nèi)具有高摩爾消光系數(shù)。Ellman (1959) 最初報(bào)告 TNB 的摩爾消光系數(shù)為 13,600M-1 cm-1（412 nm，pH 值 8.0）。因此，文獻(xiàn)中經(jīng)常引用這一數(shù)值。然而，后來(lái)的研究顯示，在 412 nm 處 14,150M-1 cm-1 的值可以更準(zhǔn)確地反映摩爾消光系數(shù)。TNB 的消光值不受 pH 值在 7.6 至 8.6 之間的變化的影響。然而，TNB 的消光值在其他溶劑中有所不同。