BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 100T 

產(chǎn)品簡介

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒zui經(jīng)典的一款

產(chǎn)品詳細(xì)信息

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒說明書
一、概述
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡zui早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA的片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此AnnexinV被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。

二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的組份：

Product code Description
556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的操作步驟 ：
貼壁細(xì)胞需用0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時(shí)，注意必須徹底清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。

四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的保存：

4℃保存，兩個(gè)月內(nèi)可保持穩(wěn)定；避免反復(fù)凍融。

五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的注意事項(xiàng) ：
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的zui后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進(jìn)行Annexin V-FITC染色，zui短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品介紹：
細(xì)胞凋亡是在胚胎發(fā)育或組織更新維護(hù)過程中的出現(xiàn)的一種正常生理過程。細(xì)胞凋亡程序有顯著的形態(tài)學(xué)特征，包括質(zhì)膜不對(duì)性和吸附性的喪失，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的皺縮，DNA核小體分裂。質(zhì)膜溶解是zui早出現(xiàn)的特征。在凋亡細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）會(huì)從磷脂雙層內(nèi)部轉(zhuǎn)移到外部，使PS暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。 Annexin V是一個(gè)分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴型磷脂結(jié)合蛋白質(zhì)，其對(duì)PS有高親和性，可以結(jié)合到暴露到質(zhì)膜外層的PS。Annexin V可以結(jié)合熒光染料，包括FITC。這種結(jié)合既保留了對(duì)PS的高親和性，同時(shí)可以作為靈敏探針，用流式細(xì)胞分析檢測鑒定正在凋亡的細(xì)胞。由于PS變化出現(xiàn)在細(xì)胞凋亡早期，F(xiàn)ITC Annexin V染色可以更早地鑒定出調(diào)亡細(xì)胞，比基于細(xì)胞核變化的檢測，例如DNA斷裂要早。

FITC標(biāo)記的 Annexin V 染色先于細(xì)胞凋亡或細(xì)胞壞死過程中伴隨產(chǎn)生的細(xì)胞膜完整性喪失的出現(xiàn)。因此，利用FITC標(biāo)記的Annexin V染色時(shí)通常結(jié)合活體染料如碘化丙啶（PI）或7-Amino-Actinomycin（7-AAD），方便研究者鑒定出早期凋亡細(xì)胞（PI陰性，F(xiàn)ITC Annexin V陽性）。具備完整細(xì)胞膜的活細(xì)胞可以阻止PI浸入，然而細(xì)胞膜壞死或破壞后就可以浸透PI。例如，活細(xì)胞檢測結(jié)果應(yīng)該是FITC Annexin V 陰性和 PI 陰性；早期凋亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽性 and PI 陰性；晚期凋亡細(xì)胞或已死亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽性和 PI陽性。此檢測不能區(qū)分出經(jīng)歷過凋亡的死細(xì)胞和經(jīng)歷其它壞死途徑的死細(xì)胞，因?yàn)槎叨紩?huì)同時(shí)被FITC Annexin V 和 PI染色。然而，持續(xù)觀察細(xì)胞凋亡都會(huì)經(jīng)歷三個(gè)階段：FITC Annexin V 和 PI 都是陰性（活細(xì)胞或沒有明顯細(xì)胞凋亡）；Annexin V陽性 和 PI 陰性（凋亡早期，具有完整細(xì)胞膜）；FITC Annexin V and PI 都是陽性（凋亡晚期或死亡）。經(jīng)歷這三個(gè)階段的細(xì)胞表明是經(jīng)歷細(xì)胞凋亡過程。相反，單一觀察顯示細(xì)胞FITC Annexin V和 PI都是陽性不能反映出細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡過程。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品組份：
Part A: 51-66121E, 10X Annexin V Binding Buffer, 50 ml
Part B: 51-65874X, FITC Annexin V , 0.5 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl
Part C: 51-66211E, Propidium Iodide Staining Solution 2.0 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl